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技術(shù)文章

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人淋巴細(xì)胞分離液人淋巴細(xì)胞分離液人淋巴細(xì)胞來源于人外周血，可根據(jù)不同實驗?zāi)康目蛇x擇密度梯度離心法、吸附分離法或其它特殊分離方法。B?yum在密度梯度離心法的基礎(chǔ)上提出通過使用Ficoll®甲泛影鈉溶液離心快速分離的方法，操作更方便、更快速。稀釋的血液在Ficoll®甲泛影鈉溶液中通過短時間的低速離心即可分層，紅細(xì)胞和粒細(xì)胞沉降至管底、淋巴細(xì)胞和血小板在中間形成2個分層。人淋巴細(xì)胞分離液使用說明：1.輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合2.無菌轉(zhuǎn)移3mlLSM到15ml離心管中。3.混...

2016 2-19
無血清培養(yǎng)無血清培養(yǎng)基(serumfreemedium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求，但對有些實驗卻不適合，如觀察一種生長因子對某種細(xì)胞的作用，這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子；又如需要測定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)（抗體、生長因子）的能力；或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物。無血...

2016 1-29
細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇實驗用試劑一、原理在不加任何條件下直接凍存細(xì)胞時，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細(xì)胞復(fù)蘇時速度要快，使之迅速通過細(xì)胞zui易受損的－5～0℃，細(xì)胞仍能生長，活力受損不大。目前常用的保護劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細(xì)胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿...

2016 1-20
細(xì)胞培養(yǎng)過程中的注意事項及試劑配制一.常用設(shè)備準(zhǔn)備室的設(shè)備：單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品規(guī)（放置消毒過的物品）、包裝臺。配液室的設(shè)備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計（測量培養(yǎng)用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。培養(yǎng)室的設(shè)備：液氮罐、儲品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱（-80℃）、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺（書寫實驗記錄）。必須放在無菌間的設(shè)備：離心機（收集細(xì)胞）、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）、...

2015 12-23
細(xì)胞凍存解決方案細(xì)胞凍存解決方案細(xì)胞凍存步驟：1.預(yù)先配制凍存液：10%DMSO+90%胎牛血清，4℃冰箱保存預(yù)冷；2.用胰酶對細(xì)胞進行消化：倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細(xì)胞（盡可能溫和）；3.再次用*培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，將預(yù)冷的凍存液加入消化*的細(xì)胞中，用滴管輕輕吹打混勻。4.在每支凍存管中加入1ml細(xì)胞液，密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。5.凍存步驟的細(xì)致直接關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇時的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐）；或者...

2015 12-8
神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基自然篩選法多年的研究使神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)，體外擴增等技術(shù)日臻完善。現(xiàn)在科學(xué)家們已克隆了人體的神經(jīng)干細(xì)胞，并將其在體外培養(yǎng)，擴增。zui近，有研究又將人的神經(jīng)干細(xì)胞成功地植入了胚胎鼠腦中，這些干細(xì)胞研究在人體的應(yīng)用，使其從實驗室逐步走向了臨床，為人類神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療提供了一個全新的視角。神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因?qū)胫委熑缜八觯┗蜣D(zhuǎn)染干細(xì)胞形成的永生細(xì)胞系不僅可以成功地整合于植入部位，而且可以穩(wěn)定地表達轉(zhuǎn)染的外源性基因，這就為中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基因治療提供了一個性能*的載體。利用溫度敏感性...

2015 10-28
心肌細(xì)胞分化培養(yǎng)基的作用由于人類心臟電生理學(xué)特性，其心肌細(xì)胞的去極化時程與嚙齒類動物差異很大。例如，人心臟生理條件下每分鐘搏動60-90次，而小鼠為500-700次，大鼠為300-400次。因此，在小動物心肌細(xì)胞模型中發(fā)現(xiàn)的理論，當(dāng)需要進一步在驗證時，由于缺失人類心肌系統(tǒng)，只能取用其他大型哺乳動物的原代分離心肌細(xì)胞替代。而這些細(xì)胞的來源都不穩(wěn)定，實驗結(jié)果的重復(fù)性也無法保證。由于*的原因，基本沒有可能獲得并培養(yǎng)原代人心肌細(xì)胞，以心肌細(xì)胞為代表的心肌細(xì)胞，是目前和將來*的人源心肌細(xì)胞來源。心肌細(xì)胞可以極...

2015 10-27
心肌細(xì)胞培養(yǎng)基的廣泛應(yīng)用心肌細(xì)胞，是目前和將來*的人源心肌細(xì)胞來源。由于人類心臟的生化和分子生物學(xué)特性，其心肌細(xì)胞的很多核心功能蛋白與小鼠等模式動物不同。例如，小鼠心肌細(xì)胞主要表達α重鏈肌球蛋白，以適應(yīng)高頻率的搏動，而人類心肌細(xì)胞主要表達β重鏈肌球蛋白，適應(yīng)低頻率的搏動。此外，以Ito和Ik為代表的鉀離子通道在不同種屬動物及人類心肌細(xì)胞間的表達和功能差異極大，對于動作電位形成的貢獻也各不相同。傳統(tǒng)研究采用的心肌細(xì)胞,主要是采用從新生或成年動物心臟分離獲得的原代心肌細(xì)胞。同時，此類細(xì)胞還存在:分離技術(shù)...

2015 10-19

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